体内药理学


免疫生物学测试

1、混合淋巴细胞反应

混合淋巴细胞反应(mixed lymphocyte reaction,MLR), 又称混合淋巴细胞培养,是指两个无关个体、功能正常的淋巴细胞在体外混合培养时,由于细胞表面HLA-II类抗原D和抗原DP不同,从而可互相刺激对方淋巴细胞转化,释放淋巴细胞因子如IL-2等。在抗体药开发体外功能实验方案中,通过检测MLR实验中释放的细胞因子量来评价这些抗体分子的活性。

 

DC-T混合淋巴细胞反应中,T细胞活化并释放细胞因子IL-2、IFN-Γ

 

2、T细胞激活、增殖实验

T 淋巴细胞的活化是免疫应答的核心,诱导 T 细胞活化、增殖及分化为效应 T 细胞需要双信号刺激。最常见的用于 T 细胞体外活化的是抗 CD3 抗体 和抗 CD28 抗体,待T细胞活化后,可以通过FACS,ELISA等方法检测IL-2、IFN-Γ等来确定T细胞活化和增值的状态。

 

FACS检测aCD3/aCD28诱导的小鼠T细胞的活化、增殖,包括CFSE峰图的增加及细胞因子IL-2、IFN-Γ

 

3、T细胞杀伤功能实验

T细胞介导的细胞毒性是细胞毒性T细胞(CTL)的特性,凡致敏的T细胞再次遇相应靶细胞抗原,可表现出对靶细胞的破坏和溶解作用,它是评价机体细胞免疫水平的一种常用指标,临床上特别是测定肿瘤患者CTL杀伤肿瘤细胞的能力,常作为判断预后和观察疗效的指标之一。

 

待测抗体为CD3/CD19 双特异性抗体; 效应细胞为纯化后的CD3+ T 细胞;靶细胞为OCI-LY-19;E:T比为10:1; 共同孵育时间为4小时;

 

4、抗体依赖的细胞毒性实验ADCC

IgG抗体可介导这些细胞发挥ADCC作用,其中NK细胞是能发挥ADCC作用的主要细胞。在抗体介导的ADCC作用的发生过程中,抗体只能与靶细胞上的相应抗原表位特异性结合,而NK细胞等效应细胞可杀伤任何已与抗体结合的靶细胞,故抗体与靶细胞上的抗原结合是特异性的,NK细胞等对靶细胞的杀伤作用是非特异性的。

 

 

5、补体依赖的细胞杀伤实验CDC

补体依赖的细胞毒性(complement dependent cytotoxicity;CDC ),是指补体参与的细胞毒作用,即通过特异性抗体与细胞膜表面相应抗原结合,形成复合物而激活补体经典途径,所形成的攻膜复合物对靶细胞发挥裂解效应。

 

 

6、流式细胞术(FACS)

 

Immune cells

Human

Mouse

B cell

CD19+

CD19+

T Cell

Total T Cell

CD3+

CD3+

Helper T Cell

CD3+, CD4+

CD3+, CD4+

Cytotoxic T Cell

CD3+, CD8+

CD3+, CD8+

Treg

CD4+, CD25+, FOXP3+

CD4+, CD25+, FOXP3+

Dendritic Cell

CD3-, CD11C+,

CD11C+, MHC II+

NK Cell

CD3-, CD56+

CD49B+ (clone DX5)

NKT Cell

CD3+,CD56+

CD3+, CD49B+ (clone DX5)

Macrophage

CD11B+, CD68+, CD163+

F4/80+, CD68+

Monocyte

CD14+, CD33+

CD11B+, CD115+, Gr-1+, Ly-6C+

MDSC

CD11B+, CD33+

CD11B+, F4/80+, Gr-1+